● 实验场地： 明向校区 经管生医楼 C510

● 负责人： 梁如琪

● 电话： 17319327323

● 适用： 全校各专业本科生

● 邮箱：liangruqi@tyut.edu.cn

● 开放预约时间： 单周周二下午

● 除提供开放项目外，学生可自行提供项目方案，经审核可行性后择机开展。

● 实验室正在改进若干经典实验，后续方案成熟后更新。

SDS-PAGE蛋白分离实验

适用：全校各专业本科生。

目的：掌握SDS-PAGE分离不同大小蛋白质的经典方法，并测定蛋白质的分子量。

原理：在变性条件下，SDS与蛋白质结合使其带大量负电荷，掩盖原有电荷差异，使蛋白质迁移速率仅取决于分子量大小。聚丙烯酰胺凝胶的孔径效应形成分子筛，小分子蛋白质迁移快，大分子迁移慢，从而实现按分子量分离。

流程：

1.样品准备

蛋白样品在含有SDS的缓冲液中煮沸变性，以确保蛋白质完全展开。

2.凝胶制备

先制备下层分离胶，灌胶完成后，加异丙醇赶走凝胶上面的气泡，胶凝固后，倒掉上层异丙醇，再制备上层浓缩胶，然后插入梳子 ，等待浓缩胶凝固后，拔出梳子。

3.电泳操作

将处理好的样品上样到凝胶孔中，应用电场后，蛋白质在电场的作用下开始迁移。当示踪染料到达凝胶下边源时，停止电泳。

4.染色与去染

完成电泳后，凝胶进行考马斯亮蓝染色以便观察蛋白质条带。染色后用脱色液进行去染，以减小背景噪音，提高条带的清晰度。

5.分子量测定

通过将样品条带与标准分子量标记的蛋白质条带在进行比对测定出样品蛋白质的分子量。

项目完成所需时间（3--4小时）。